WWW.INFO.Z-PDF.RU
БИБЛИОТЕКА  БЕСПЛАТНЫХ  МАТЕРИАЛОВ - Интернет документы
 

«МБОУ СОШ № 101 с углубленным изучением экономики Демского района ГО г.Уфа РБ Научные руководители: Юсупова В.М., учитель биологии высшей категории, МБОУ СОШ № 101 Ямалеева А.А., ...»

ХАРРАСОВА АЛИНА АГЛЯМОВНА

МБОУ СОШ № 101 с углубленным изучением экономики Демского района ГО г.Уфа РБ

Научные руководители:

Юсупова В.М., учитель биологии высшей категории, МБОУ СОШ № 101

Ямалеева А.А., доктор биологических наук, профессор БГУ,

Усачев С.А., аспирант кафедры биохимии БГУ

«ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКТИНОВ ТРУТОВЫХ ГРИБОВ»

Актуальность данного исследования: миколектины представляют практический интерес как средство, обладающее противомикробной, противовирусной и иммуностимулирующей активностью.

Цель: изучение лектинов трутовых грибов

Задачи:

выделить миколектины из исследуемых трутовых грибов

определить количество белков в трутовых грибах методом Лоуриопределить их наибольшую гемагглютинирующую активность с эритроцитами первой группы крови в зависимости от видовой принадлежности грибов

Содержание:

Обычные антибиотики малоэффективны при вирусных заболеваниях и потребность в новых средствах очень высока. Антивирусные свойства препаратов на основе грибов заключены в способности ингибировать активность вирусных ферментов, биосинтез вирусных нуклеиновых кислот или абсорбцию и внедрение вирусов в материнские клетки. В значительной степени этому соответствуют лектины, являющиеся сложными белками, обнаруженными в большинстве исследованных низших и высших грибах.[2,3]. Лектины — (от лат. lego — выбираю), белки, обладающие свойством специфично и обратимо связывать углеводы или их остатки в биополимерах.



Одним из свойств лектинов является их способность к реакции гемагглютинации с эритроцитами. Связано это с тем, что они обладают углеводной специфичностью к определенным рецепторам эритроцита. На поверхности эритроцита имеются олигосахаридные цепи, состоящие из моносахаридов. Различные моносахара, соединяясь в определенную последовательность, образуют олигосахарид, который присоединяется одним концом к белковой молекуле, погруженной в липидный матрикс мембраны. Олигосахариды мембранных белков служат своеобразными лигандами для связывания с лектинами, вызывая разнообразные эффекты в процессах функционирования мембраны. При этом, процесс взаимодействия с определенными углеводными остатками происходит с определенными лектинами [1]. Для изучения биохимической активности и общей характеристики лектинов на начальных этапах научного поиска применяется, прежде всего, реакция гемагглютинации с эритроцитами различных групп крови, что позволяет сделать вывод не только о содержании лектинов в исследуемом грибе, но и о степени их биологической активности.

Объект исследований: трутовые грибы

Методика исследований

Для выделения лектинобогащенных экстрактов навески грибов массой 1 г, измельчались, суспензировались и заливались ацетатным буфером (рН 3,8), с последующим выдерживанием на холоде при 4 о С в течение 12 часов, и центрифугированием при 3000 об/мин — 15 мин. Далее использовалась надосадочная жидкость. После, содержание лектинов в исследуемых грибах определялось методом Лоури. Активность лектинов выявлялась реакцией гемагглютинации с эритроцитами первой группы крови.

Колориметрический метод определения белка по Лоури основан на реакции циклических аминокислот белков с реактивом Фолина, дающей синее окрашивание; применяют для определения белка в растворах с концентрацией от 10 до 100 м кг.





ХОД РАБОТЫ: К 0,4 мл раствора белка добавляют 2 мл реактива С. Смесь перемешивают и через 10 минут приливают к ней 0,2 мл рабочего раствора E. Интенсивность окраски определяют на ФЭКе с красным светофильтром через 30 мин. Количество белка находят по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой 20 мг чистого белка ( в пересчете на абсолютной сухой вес) растворяют в 100 мл 0,1 н NaOH (1 мл содержит 0,2 мг белка) и в 10 мерных колбах на 25 мл вносят 0,125; 0,25; 0,5; 1,25; 1,875; 2,5; 3,125; 3,75; 4,375; 5,00 мл стандартного раствора белка и доводят водой до метки, перемешивают и из каждой колбы берут по 0,4 мл для определения белка по указанной прописи. По полученным данным вычерчивают калибровочную кривую. Оборудование: Фотоэлектроколориметр, круглодонная колба на 2-2,5л с обратным холодильником со шлифом, склянки для реактивов на 1 л, 0,5 л, плоскодонные колбы на 2л, 0,5 л, 100 мл, пробирки градуированные на 10 мл, градуированные пипетки, микробюретки.

Реактивы: Вольфрамат натрия (Na2WoO4*2Н2O), молибдат натрия, фосфорная кислота H3PO4, концентрированный HCI (плотность -1,19 ),бромная вода, Na2CO3 0,1 н; NaOH; 5%-ный раствор CuSO4*5H2O; 1%-ный раствор сегнетовой соли,чистые препараты белков (альбумин, глобулин,казеин другие.).

1. Реактив А-2% раствор Na2CO3 в 0,1 н NaOH.

2. Реактив Б-0,5% CuSO4*5H2O в 1% растворе двухзамещенного виннокислого

калия или натрия ( K2C4H4O6 ; Na2C4H4O6).

3. Раствор С – опытный раствор, готовят смешивая реактивы А и Б в

соотношении 50:1 по объему ( годен в течения дня ).

4.Реактив Е (Фолина ).

5.Чистые препараты белков ( альбумина, глобулина, казеин и другие ).

Метод определения активности лектинов-реакция гемагглютинации (РГА)

основан на способности лектинов агглютинировать эритроциты крови, на поверхности которых находится широкий набор углеводов, принадлежащих к гликопротеинам.

Подготовка эритроцитов. Для предотвращения свертывания крови к ней добавляли 3,5% раствор цитрата натрия. Эритроциты трижды отмывали 0,9%- ным раствором хлорида натрия при 1000 об/мин по 10 минут.

Постановка РГА. Для проведения РГА использовали 2%- ный раствор эритроцитов.В микротитратор Такачи наносили фосфатно-солевой буфер (рН 7,4) по 50 мкл. Затем, в первые лунки наносили исследуемый раствор и наносили во вторую лунку. Затем, в третью и т.д., получив, таким образом, разведение экстракта соответственно в 2,4, 8, 16 и т. д. раз. Тщательно перемешивая содержимое каждой лунки, наносили 2 %-ный раствор отмытых эритроцитов крови человека. Результат определили через 10 часов. Если эритроциты собирались одной точкой на дне лунки, считали, что агглютинации нет. Если они располагались сплошным слоем на дне лунки – гемагглютинация положительная.

Результаты собственных исследований.

Белки были выделены из следующих трутовых грибов: Трутовик опаленный, Эксидия железистая, Феллодон сросшийся, Постия вяжущая, Трутовик окаймленный, Трихаптум еловый.

Анализ лектиновой активности проводился по реакции гемагглютинации с эритроцитами первой групповой принадлежности крови, взятой у практически здоровых волонтеров. По результатам определения количества лектинов по методу Лоури, в исследуемых грибах содержится большое количество белков, включая лектины (Трутовик опаленный 0,01 мг/ г сухого вещества, Эксидия железистая 0,1 мг/ г сухого вещества, Феллодон сросшийся 0,47 мг/г сухого вещества, Постия вяжущая 0,4 мг/г сухого вещества, Трутовик окаймленный 0,32 мг/ г сухого вещества, Трихаптум еловый 0,17 мг/ г сухого вещества).

В исследуемых грибах обнаружена высокая активность лектинов. Показано, что лектиновая активность в реакциях гемагглютинации зависит от видовой принадлежности грибов, что связано с различным химическим строением рецепторов клеток и объясняется различной углеводной специфичностью данных грибов.

Анализ результатов и выводы:

1.По результатам исследования в шести видах трутовых грибов было обнаружено большое количество белков. Наибольшее количество белков было выделено из Трихаптума елового ( 0,85 мг/ г сухого вещества)

2.В связи с тем, что белки выделялись при рН=3,8 ацетатным буфером, можно с уверенностью сказать, что основным составом белков в трутовых грибах являются лектины.

3.После проведенной реакции гемагглютинации с эритроцитами человека была зафиксирована высокая активность лектинов в трутовых грибах.

4.Наибольшая лектиновая активность нами обнаружена в Эксидии железистой (титры 1:512)

В результате проведённого эксперимента подтвердилась гипотеза о возможности применения лектинов данных грибов в медицинской практике.

Практическое значение: результаты наших исследований можно считать первым этапом для дальнейшего изучения биохимических свойств лектинов трутовых грибов в перспективе их применения в медицинской практике.

Область внедрения: медицина

Наличие личных публикаций в печатных изданиях, электронные публикации, участие в грантах – не имею

Список использованных источников:

1. Игнатов В. В. Углеводузнающие белки – лектины //Соросовский образовательный журнал, №2, 1997.

2. Корсун В. Ф., В. М. Лахтин, Е. В. Корсун, А. Мицконас Фитолектины, М., Издательство: «Практическая Медицина», 2007. — 288с.

3. Ямалеева А. А. Лектины растений и их биологическая роль. — Уфа: Изд-во Башк. ун-та, 2001. — 204 с.

Похожие работы:

«ПРОГРАММА ВСТУПИТЕЛЬНЫХ ИСПЫТАНИЙ В АСПИРАНТУРУ ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА РОССИИ ПО ДИСЦИПЛИНЕ 03.02.03 МИКРОБИОЛОГИЯI. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ Программа вступительного экзамена составлена на основании федеральных государственных требований к структуре основной профессиональной образовательной программы подготовки научно-педагогич...»

«МБДОУ детский сад "Ромашка" с. ПуштулимСценарий экологического КВН "Зимушка – Зима"Воспитатели: Новикова И.Н. Александрова Г.В. Цель: обобщение представлений о зиме. Задачи: закрепить знания детей о зиме, о явлениях природы, которые происходят в эт...»

«Конспект открытого урока по химии по теме: Вода – знакомая и неизвестная Тема урока: Вода – знакомая и неизвестная “Воде была дана волшебная власть стать соком жизни на Земле” Леонардо да Винчи Цель урока: повторить, обобщить и расширить знания учащихся о воде, как главном богатстве п...»

«ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА Факультативный курс Земля – наш дом родной разработан на основе авторской программы Вахрушева А.А. по образовательной программе Школа 2100. В целом факультативный курс позволяет углубить, расширить, и сис...»

«ДЛЯ СТУДЕНТОВ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА ПО КУРСУ ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ. ЗАНЯТИЕ № 1МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Обща...»

«МУНИЦИПАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "КУКУЙСКИЙ ЦЕНТР ОБРАЗОВАНИЯ"ПРОГРАММА АНТИНАРКОТИЧЕСКОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ "УМЕЙ СКАЗАТЬ "НЕТ!""Разработал:АСТАПОВА ОЛЬГА ИВАНОВНА, заместитель директора по воспитательной работе ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА Одним из новых направлений воспитательной работы с подрастающим поколением (нар...»

«Аннотация рабочей программы дисциплины Б1.Б.8 Анатомия человекаНаправление 34.03.01 Сестринское дело Б1.Б Базовая часть Место дисциплины в учебном плане: цикл, в каких семестрах изучается, количество з.е.; количество часов в...»

«Антоневич Е.Н. Международный клуб учёных (МКУ) СПб. Инженер-исследователь. Antonpet14@yandex.ru ГЕНОДРЕВО ФТС–УНИВЕРСАЛЬНАЯ СИСТЕМА МНОГОУРОВНЕВОЙ ДИАЛЕКТИКИ ОТ ДРЕВНЕЙ ГЕНЕТИКИ КНИГИ ПЕРЕМЕН ДО СОВРЕМЕННОЙ СИСТЕМОГЕНЕТИКИ Аннотация. Предлагается ме...»

«Муниципальное общеобразовательное учреждение "Средняя общеобразовательная школа № 25" "УТВЕРЖДАЮ" "" 2016 г. Рабочая программа учебного предмета (курса) "ХИМИЯ " название предмета, курса (базовый уровень) для 8 классаСоставитель: Краснова...»








 
2018 www.info.z-pdf.ru - «Библиотека бесплатных материалов - интернет документы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 2-3 рабочих дней удалим его.